磁珠法病毒RNA/DNA提取试剂盒

产品货号：

YTB4636

中文名称：

磁珠法病毒RNA/DNA提取试剂盒

英文名称：

BalbMag Viral RNA/DNA Isolation Kit with Magnetic Beads)

产品规格：

10T|50T|200T

发货周期：

1～3天

产品价格：

询价

本制品是一种使用新型核酸纯化介质包被的磁珠，从含病毒的血浆、血清、体液、拭子及细胞及其培养上清、组织等样品中安全、快速、便捷、稳定、高效、高质量地抽提RNA/DNA的试剂盒。抽提获得的病毒RNA/DNA样品(可能同时含有样品中的其它RNA/DNA)，后续可以用于病毒感染检测、病毒滴度检测各种常规用途。

本试剂盒适用于含病毒的血浆、血清、体液、拭子及细胞及其培养上清、组织等样品中病毒RNA/DNA的抽提。对于样品中RNA/DNA含量较低的情况下，为提高病毒RNA/DNA的提取量，建议自备Carrier RNA。Carrier RNA一方面可以提高微量病毒RNA/DNA在纯化过程中与磁珠的结合效率和洗脱效率，另一方面可以降低被可能存在的痕量残留RNase降解的风险。Carrier RNA在病毒含量越低的情况下效果越为明显。

本试剂盒抽提得到的病毒RNA/DNA可用于qRT-PCR、反转录、RT-PCR、PCR、qPCR、Northern、Southern、点杂交(Dot blot)、纯化mRNA、体外翻译、RNase protection assay、cDNA或DNA克隆等下游实验；也可用于基因表达芯片分析(Microarray)、高通量测序(High throughput sequencing)等对RNA/DNA质量要求较高的情况。

产品特点

本试剂盒使用安全。本试剂盒通过特殊的磁珠进行病毒RNA/DNA分离纯化，能有效避免传统的Trizol法抽提时使用的酚、氯仿等有毒有害有机试剂。
本试剂盒使用快速、便捷。本试剂盒采用磁珠纯化，无需繁琐的病毒RNA/DNA沉淀步骤，抽提操作过程仅15～20分钟。相比于传统的Trizol抽提法或DNA抽提方法，本试剂盒的操作流程显著简化，缩短了抽提时间，降低了病毒RNA/DNA被降解的风险。和国外同类磁珠纯化产品相比，所需操作步骤和操作时间基本一致。

组分	10T	50T	200T
BalbMag磁珠	0.2mL	1mL	4mL
裂解液	6mL	30mL	120mL
结合液	2.5mL	12.5mL	50mL
洗涤液I	6.5mL	32mL	125mL
洗涤液II	3.6mL	18mL	36mL×2
洗脱液	1mL	5mL	20mL

保存：室温，有效期1年。

注意事项

BalbMag磁珠长期不使用时，可以4℃保存，4℃可以保存更长时间。
首次使用前，结合液和洗涤液II按照下表或瓶标上的指示加入相应量的无水乙醇，混匀，并在瓶上做好标记。
组分 10T 50T 200T
原体积无水乙醇原体积无水乙醇原体积无水乙醇
结合液 2.5mL +3.5mL 12.5mL +17.5mL 50mL +70mL
洗涤液II 3.6mL +9mL 18mL +45mL 36mL×2 +90mL×2
如果样品中含有细胞或组织，不影响病毒RNA/DNA的抽提，但须注意抽提获得的病毒RNA/DNA中包含细胞或组织的RNA/DNA。
为提高病毒RNA/DNA的提取量，推荐使用我司的Carrier RNA或自备Carrier RNA。
本试剂盒提供的所有试剂和耗材都是DNase/RNase-free，操作时应小心，避免被污染。所有自行准备的试剂和耗材也都应是DNase/RNase-free。如果可能有DNase/RNase污染，可考虑用0.01%的DEPC水浸泡过夜，然后高温高压灭菌并烘干。操作时应避免对着样品或所使用的试剂盒耗材呼气或说话，以防RNase污染。建议戴一次性口罩操作。
对于操作环境中DNase/RNase的去除，推荐使用核酸酶喷雾清除剂以去除实验桌面上或其它接触面上的DNase/RNase。
使用冻存的样品抽提RNA的效果通常比新鲜的样品差一些。因为在样品冻融过程中一些RNase会被释放出来并消化样品中的RNA，建议尽量避免冻融。对于病毒样品，推荐使用病毒RNA保存液进行保存以保证样品RNA的完整性。
本试剂盒所有操作均在室温进行，操作时无需冰浴。所有离心也均在室温进行。
结合液、洗涤液中首次使用前添加无水乙醇后，须旋紧瓶盖以防挥发，并须按照易燃试剂的相关规范进行存放和使用。

本试剂盒抽提病毒RNA/DNA的基本流程如图1所示。样品在裂解液中迅速裂解，释放出总RNA/DNA，然后让RNA/DNA特异性地结合到磁珠上，再通过3次洗涤充分去除非特异性结合的蛋白、盐等杂质，最后用洗脱液将高纯度的RNA/DNA洗脱下来。

图1.磁珠法病毒RNA/DNA提取试剂盒抽提流程示意图。

使用方法

样品的准备。
- 液体样品的准备：
  含病毒的血浆、血清、无细胞体液、拭子、细胞培养上清等样品，按照常规方法取样。每100μL液体样品加入300μL裂解液。轻轻颠倒混匀3～5次。
  选做：为提高病毒RNA/DNA的提取量，建议在不含或含很少细胞或者组织的样品中加入Carrier RNA。推荐使用百奥莱博的Carrier RNA，或使用下面方法提取：取任意新鲜的细胞或组织，用抽提试剂盒(推荐柱式动物RNA提取试剂盒或Trizol法总RNA抽提试剂)提取RNA，作为Carrier RNA。每个病毒样品需要2～5μg Carrier RNA，直接添加至裂解液中即可。
- 细胞样品的准备：
  收集50～100万左右带有病毒的细胞。对于悬浮细胞，1000～2000×g离心1分钟后弃上清，加入300μL裂解液，轻轻吹打8～10次至固悬物溶解、溶液澄清；对于贴壁细胞，吸净培养液后加入300μL裂解液，轻轻吹打5～10次至固悬物溶解、溶液澄清，转移至一洁净离心管内。
- 组织样品的准备：
  取15～20mg带有病毒的动物组织，置于液氮中研磨成粉末，立即加入600μL裂解液。也可将组织置于1.5mL离心管中，迅速加入600μL冰浴预冷的裂解液，用微型电动匀浆器匀浆，或者用普通玻璃匀浆器进行匀浆。研磨或匀浆后，轻轻吹打匀浆液8～10次，室温放置3～5分钟。然后约14000×g离心2分钟，将上清液移至新的离心管中。对于比较容易裂解且匀浆很充分的组织(如肝组织、脑组织等)可以不用高速离心而直接进入步骤2。
  - 细胞的数量一般不超过500万，不超过100万细胞宜使用300μL裂解液，多于100万细胞宜使用600μL裂解液。动物组织的用量一般不超过30mg，用量过多可能会因裂解不充分导致得率下降。组织样品在裂解和离心后，离心管下部可能会有一些胶状物质，宜作为上清转移至下一步操作。如果弃除胶状物，会导致得率下降约30～50%。后续加入结合液后胶状物会消失。离心是为了去除未匀浆充分的明显块状物。如果裂解后仍有粘稠物，需增加吹打次数至溶液完全澄清。对于富含RNase的样品，裂解液中宜添加DTT至终浓度为40mM或添加β-巯基乙醇至终浓度为1%。
加入等体积(指病毒样品和裂解液的总体积)结合液至裂解液中，轻轻颠倒混匀3～5次。此时可能会有沉淀物产生，属于正常现象。
加入20μL BalbMag磁珠(使用前务必混匀)，轻柔混匀后，室温放置3～5分钟。将离心管置于磁力架的磁场中，待磁珠完全聚集后，小心吸除液体。
- 磁珠在使用前一定要涡旋或震荡混匀。如有必要，可适当增加磁珠用量，延长结合时间以提高得率。
加入600μL洗涤液I，轻柔震荡使磁珠分散开，颠倒2次后将离心管置于磁力架的磁场中，待磁珠完全聚集后，尽量吸净液体。
加入600μL洗涤液II，轻柔震荡使磁珠分散开，颠倒2次后将离心管置于磁力架的磁场中，待磁珠完全聚集后，尽量吸净液体。
重复步骤5一次。
将离心管室温放置3～10分钟，或置于37℃鼓风烘箱5分钟，确保残留的乙醇等微量液体完全挥发。
加入50～100μL洗脱液，轻柔震荡使磁珠悬于溶液中，室温孵育3～5分钟，其间甩动离心管1～2次。将离心管置于磁场中，待磁珠完全聚集后，小心吸取溶液至新离心管中，后续可以置于-20℃保存。所得溶液即为纯化的RNA/DNA。
- 如需获得更高浓度的样品，可把洗脱液的体积减小至20μL，但洗脱下来的RNA/DNA量会相对减少。室温较低时，洗脱液在37℃预热片刻对提高得率会有所帮助。此外，洗脱后的溶液再次加回到原磁珠再洗脱一次，可提高得率约10～30%；或者在第一次洗脱后使用新的洗脱液再洗脱一次，会获得约为第一次洗脱量15～40%的RNA/DNA。

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